Jensen Ackles 1978 március 1-jén született a Texas állambeli Dallas-ban. Édesapja Alan Ackles színész, aki rendszeres szereplője volt a Dallas-nak és a Walker, a texasi kopó-nak is. Két éves kora óta modellkedik, azóta számtalan TV-s reklámban szerepelt, de 17 éves koráig kerülte a filmes világot. Akkor kötött vele szerződést egy színészügynökség, majd nem sokkal később meg is kapta az első szerepét. A középiskola után átköltözött Los Angeles-be, ahol azonnal kapott egy epizódszerepet a Sweet Valley High című sorozatban, majd állandó szereplője lett egy másik iskolai témájú szappanoperának, a Mr. Rhodes-nak. A sorozat nézettsége a kezdetektől fogva alacsony volt, de ugródeszkaként szolgált, hogy bejusson az NBC hosszú évek óta folyó szappanoperájába, az Életünk napjai-ba. 97-2000 között állandó szereplője volt a sorozatnak. 2001-ben szerepelt a Marilyn Monroe életéről szóló Blonde című minisorozatban, és ekkor tűnt fel először a Dark Angel-ben, ekkor még epizódistaként. A Max-szel együtt megszökött Ben-t játszotta, aki a külvilág borzalmainak hatására megőrült. Állandó szereplő csak a következő évadtól lett, mint Alec, Ben ikertestvére. A sorozat vége után rendszeresen feltűnt a Dawson és a haverokban. 2004-ben producerként is kipróbálta magát a The Plight of Clownana-val, amelyben szerepelt is. Ebben az évben lett állandó szereplője a Smallville-nek. Az igazi kiugrást mégis 2005 hozta meg számára, amikor is a Szívek szállodájából ismert Jared Padalecki-vel főszereplője lett a Warner Bros új sorozatának, a Supernatural-nek. A sorozat egy, a természetfeletti gonosz ellen küzdő különleges képességekkel megáldott testvérpárról szól. A Supernatural első évada még véget sem ért, de a stúdió már a következő évadról tárgyal a két főszereplővel tehát úgy tűnik Jensen karrierje fölfelé ível.